home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ Software Vault: The Sapphire Collection / Software Vault (Sapphire Collection) (Digital Impact).ISO / cdr16 / med9410e.zip / M94B0782.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-11-11  |  4KB  |  55 lines
  1.        Document 0782
  2.  DOCN  M94B0782
  3.  TI    Analysis of strand transfer synthesis by reverse transcriptases.
  4.  DT    9412
  5.  AU    Buiser RG; Univ. of Rochester
  6.  SO    Diss Abstr Int [B]; 54(7):3597 1994. Unique Identifier : AIDSLINE
  7.        ICDB/94605826
  8.  AB    Models of retrovirus replication require the viral reverse transcriptase
  9.        (RT) to catalyze two distinct strand transfer reactions. In this
  10.        process, an RNA primer is elongated on one template and then transferred
  11.        to another template for additional elongation. It is thought that the RT
  12.        ribonuclease H (RNase H) activity is involved in both transfer
  13.        reactions. The properties of reverse transcriptases required for strand
  14.        transfer synthesis have been examined using poly(rA) as a model
  15.        substrate. In this system, strand transfer is observed by the appearance
  16.        of products much longer than the templates used to generate them. RTs
  17.        from human immunodeficiency (HIV), avian myeloblastosis (AMV), and
  18.        murine leukemia (MuLV) viruses differ in molecular mass and subunit
  19.        composition. However, they all catalyze strand transfer synthesis on
  20.        poly(rA)300, generating characteristically long products. An RNase H
  21.        deficient enzyme, HIV-RT(RD,) catalyzed strand transfer synthesis to the
  22.        same degree as native HIV-RT, indicating that a functional RNase H
  23.        activity is not required for this process. Additionally,
  24.        N-ethylmaleimide (NEM), which inhibits RNase H but not polymerase
  25.        activity of HIV-RT, did not diminish strand transfer synthesis. Highly
  26.        processive DNA synthesis by each RT was found to be a requirement for
  27.        the strand transfer reaction. Catalysis of strand transfer synthesis is
  28.        not a property of all DNA polymerases, since the Klenow fragment of
  29.        Escherichia coli DNA polymerase I is unable to catalyze this reaction.
  30.        These results suggest that strand transfer synthesis relies on an
  31.        unidentified functional activity present in RTs. The ability of RTs to
  32.        catalyze strand transfer, or template switching, from internal regions
  33.        of RNA templates has also been examined. To study this phenomenon, a
  34.        system of donor and acceptor templates was employed in which homologous
  35.        strand transfer can occur from a homopolymeric sequence positioned
  36.        internally on the donor template. Our results indicate that HIV-, AMV-,
  37.        and MuLV-RTs are all able to catalyze strand transfer from this internal
  38.        homopolymeric sequence. Catalysis of this reaction is not dependent upon
  39.        RNase H activity, since HIV-RT(RD) is able to catalyze the reaction
  40.        efficiently. Additionally, NEM did not inhibit strand transfer by either
  41.        the native or RNase H deficient forms of HIV-RT. Our data further
  42.        indicate that template switching may be promoted by RT pausing at a
  43.        specific site on the donor template. Conditions that increase RT pausing
  44.        at this site also increase template switching. These results suggest
  45.        that transient RT pausing at specific sites on the viral genome during
  46.        reverse transcription may promote strand transfers that in turn lead to
  47.        recombination. (Full text available from University Microfilms
  48.        International, Ann Arbor, MI, as Order No. AAD93-34491)
  49.  DE    DNA Polymerase I/GENETICS  Ethylmaleimide/PHARMACOLOGY  *Reverse
  50.        Transcriptase/*GENETICS  Ribonucleases/*GENETICS  THESIS
  51.  
  52.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  53.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  54.  
  55.